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分析洗滌在ELISA過程中的重要性
點擊次數(shù)：2454 更新時間：2021-01-26
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟，卻是決定成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附作用屬普遍性的，因此在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，在洗滌時應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。
洗滌如不*，特別在后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性lgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗抗體作用而產(chǎn)生干擾。
ELISA板的洗滌一般可采用以下步驟:①吸干反應(yīng)液;②將洗滌液注滿板孔;③放置2~3min，略作搖動;④吸干孔內(nèi)液。也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為3~4次，有時甚至需洗5~6次。
洗滌方法可用手動或全自動沖洗，不論使用哪種方法，都要滿足下列條件:①每個孔都應(yīng)充滿洗滌液；②每步?jīng)_洗后都要*去凈洗滌液；③沖洗次數(shù)要足夠；④足夠的浸泡時間。.
一般情況下，浸泡時間長和增加沖洗次數(shù)可以降低相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，但過度沖洗則降低陽性血清與陰性血清的吸光度比值，在自動沖洗時常有此種現(xiàn)象。當(dāng)用自動注意沖洗器的管是否有堵塞。如果用自動或半自動沖洗器，在沖洗過程中可以觀察到酶標(biāo)板，從而可以保證洗滌的效果。
洗滌液中的成分不同也會影響ELISA檢測結(jié)果。洗滌液可以是:（1）蒸餾水；（2）水+0.05%Tween20；（3）蒸餾水+0.5%BSA；（4）蒸餾水+0.05%Tween20+0.5%BSA。結(jié)果表明洗滌液中加Tween20和BSA時洗滌的效果相同，同時使用Tween20和BSA對檢測結(jié)果并無明顯改善，但僅用蒸餾水洗滌時會使弱陽性血清反應(yīng)轉(zhuǎn)為陰性。
